Úsáid agus réamhchúraimí feadáin lártheifneora ultra-scagacháin
1) Roghnaigh feadán ultrafiltration oiriúnach.Tabhair faoi deara go bhfuil difríocht idir na seicní UF ina leibhéal lamháltais do cheimiceáin éagsúla.De ghnáth, is féidir feadáin ultrafiltration a bhfuil meáchan móilíneach gearrtha 10 kDa acu a roghnú le scoite meáchan móilíneach nár chóir go mbeadh níos mó ná 1/3 de mheáchan móilíneach an phróitéin úis, mar shampla 35 kDa.Má tá meáchan móilíneach an phróitéin leasa thart ar 10 kd, is féidir feadán ultrascagtha le scoite meáchan móilíneach de 3 KD a úsáid.
(2) Tá an ultra-scagadh, úrcheannaigh, tirim, le huisce ultrapure curtha leis roimh úsáid agus uisce a rith go hiomlán tríd an scannán, folctha oighir nó cuisneoir réamhfhuaraithe ar feadh cúpla nóiméad.Déantar an t-uisce a dhoirteadh ansin, ie an leacht próitéin, agus cé mhéad a chuirtear leis, cibé acu nach mó ná an líne bán ag barr an fheadáin.Tá an oibríocht éadrom, agus ní mór an feadán ultra-scagachán a réamhfhuascailt ar oighear sula gcuirtear an tuaslagán próitéine leis.
3) Bhí mais agus lár an domhantarraingthe chun an chothromaíocht a bhaint amach.Tabhair faoi deara nach bhfuil an luas rothlach agus an luasghéarú an-tapa, ar shlí eile déanann sé dochar díreach don membrane ultrafiltration.Cuireadh tús le ultrascagadh lártheifeacha (lártheifneoir réamhfhuaraithe go 4 céim).Tar éis an RPM de lártheifneoirí éagsúla a thiontú go g, bhí sé difriúil.Coigeartaíodh luasghéarú an lártheifneora ar a laghad, ag laghdú an bhrú ar an membrane.Tabhair faoi deara, bí cinnte an lártheifneoir a fhágáil tar éis don lártheifneoir a luas ceann scríbe a bhaint amach, nó má tá fadhb agat, ní féidir leat é a láimhseáil den chéad uair.Coigeartaíodh treoshuíomh an scannáin chuig an fhearsaid de réir na dtreoracha (tá cás lártheifneoir uilleach ó membrane go ais ingearach).In úsáid phraiticiúil, tá an luas rothlaithe ginearálta níos ísle ná sin sna treoracha, ionas gur féidir saol an fheadáin lártheifneora a leathnú.
3) Bhí mais agus lár an domhantarraingthe chun an chothromaíocht a bhaint amach.Tabhair faoi deara nach bhfuil an luas rothlach agus an luasghéarú an-tapa, ar shlí eile déanann sé dochar díreach don membrane ultrafiltration.Cuireadh tús le ultrascagadh lártheifeacha (lártheifneoir réamhfhuaraithe go 4 céim).Tar éis an RPM de lártheifneoirí éagsúla a thiontú go g, bhí sé difriúil.Coigeartaíodh luasghéarú an lártheifneora ar a laghad, ag laghdú an bhrú ar an membrane.Tabhair faoi deara, bí cinnte an lártheifneoir a fhágáil tar éis don lártheifneoir a luas ceann scríbe a bhaint amach, nó má tá fadhb agat, ní féidir leat é a láimhseáil den chéad uair.Coigeartaíodh treoshuíomh an scannáin chuig an fhearsaid de réir na dtreoracha (tá cás lártheifneoir uilleach ó membrane go ais ingearach).In úsáid phraiticiúil, tá an luas rothlaithe ginearálta níos ísle ná sin sna treoracha, ionas gur féidir saol an fheadáin lártheifneora a leathnú.
(4) Nuair a bheidh tú comhchruinnithe go dtí an 1ml atá fágtha, tóg 50ul de thuaslagán maolánach, cuir 10ul de shreabhadh tríd agus féach an bhfuil aon dath gorm ann, mar bhreithiúnas an bhfuil próitéin in easnamh ar an bhfeadán ultrascagtha.Má tá an feadán sceite, doirt arís an ciseal uachtarach agus sruth isteach i bhfeadán nua chun ultrascagadh a thosú.Chun a chinneadh go beacht an raibh feadáin caillte, lártheifneoir ar feadh 10min le 5mgml de BSA roimh an tsreabhadh, ag rith ar gliú próitéin, nó measúnú amh Bradford, agus leanúint ar aghaidh ag cur leis an réiteach próitéine tiubhaithe atá fágtha (a oibríonn ar oighear agus a chosc próitéiní ó théamh) go dtí. tá an tiúchan ar fad curtha leis.Bí cúramach le linn lártheifneora má tharlaíonn deascadh próitéiní, rud a fhágann go ndúnfar feadán.Má tharlaíonn deascadh, cinntigh an é an chúis shonrach le deascadh tiúchan próitéin iomarcach nó maolán míchuí;Is féidir an chéad cheann a réiteach trí ultrafiltration feadáin ultra-scagacháin iolracha ag an am céanna, ag laghdú an tiúchan, agus an dara ceann trí réitigh maolánacha éagsúla a mhalartú go dtí nach dtarlaíonn aon deascadh próitéine.
(4) Nuair a bheidh tú comhchruinnithe go dtí an 1ml atá fágtha, tóg 50ul de thuaslagán maolánach, cuir 10ul de shreabhadh tríd agus féach an bhfuil aon dath gorm ann, mar bhreithiúnas an bhfuil próitéin in easnamh ar an bhfeadán ultrascagtha.Má tá an feadán sceite, doirt arís an ciseal uachtarach agus sruth isteach i bhfeadán nua chun ultrascagadh a thosú.Chun a chinneadh go beacht an raibh feadáin caillte, lártheifneoir ar feadh 10min le 5mgml de BSA roimh an tsreabhadh, ag rith ar gliú próitéin, nó measúnú amh Bradford, agus leanúint ar aghaidh ag cur leis an réiteach próitéine tiubhaithe atá fágtha (a oibríonn ar oighear agus a chosc próitéiní ó théamh) go dtí. tá an tiúchan ar fad curtha leis.Bí cúramach le linn lártheifneoraithe má tharlaíonn deascadh próitéiní, rud a fhágann go ndúnfar feadán.Má tharlaíonn deascadh, cinntigh an é an chúis shonrach le deascadh tiúchan próitéin iomarcach nó maolán míchuí;Is féidir an chéad cheann a réiteach trí ultrafiltration feadáin ultra-scagacháin iolracha ag an am céanna, ag laghdú an tiúchan, agus an dara ceann trí réitigh maolánacha éagsúla a mhalartú go dtí nach dtarlaíonn aon deascadh próitéine.
(5) Úsáidtear na chéad chúpla céim chun an próitéin a dhíriú, agus má tá an maolán le hathrú, cuir go réidh maolán nua (ultra-scagadh trí membrane ultrafiltration 0.22um) go dtí thart ar 1ml den phróitéin iomlán, agus athchruinnigh go dtí thart ar 1ml ar feadh trí. am as a chéile, leis an méid deiridh tiubhaithe deiridh ag brath ar an tiúchan próitéine atá ag teastáil, go ginearálta nach mó ná 500ul, ach freisin laistigh de 200ul.1000 × nó níos mó a bhaint amach trí huaire, go bunúsach an oiread athraithe maoláin, arna ríomh trí shaibhriú toirte 10 × nó mar sin ar a laghad gach uair.
(5) Úsáidtear na chéad chúpla céim chun an próitéin a dhíriú, agus má tá an maolán le hathrú, cuir go réidh maolán nua (ultra-scagadh trí membrane ultrafiltration 0.22um) go dtí thart ar 1ml den phróitéin iomlán, agus athchruinnigh go dtí thart ar 1ml ar feadh trí. am as a chéile, leis an méid deiridh tiubhaithe deiridh ag brath ar an tiúchan próitéine atá ag teastáil, go ginearálta nach mó ná 500ul, ach freisin laistigh de 200ul.1000 × nó níos mó a bhaint amach trí huaire, go bunúsach an oiread athraithe maoláin, arna ríomh trí shaibhriú toirte 10 × nó mar sin ar a laghad gach uair.
Am postála: Nov-09-2022