Roinnt einsímí a úsáidtear go coitianta i dturgnaimh PCR

Imoibriú slabhra polaiméire, giorraithe marPCRi mBéarla, is teicníocht bitheolaíocht mhóilíneach a úsáidtear chun blúirí DNA ar leith a aimpliú.Is féidir é a mheas mar mhacasamhlú DNA speisialta lasmuigh den chorp, rud a d'fhéadfadh méid an-bheag DNA a mhéadú go mór.Le linn an iomlánPCRpróiseas imoibrithe, tá ról ríthábhachtach ag aicme amháin substaintí – einsímí.

1. Taq DNA

I dturgnaimh i laethanta tosaigh naPCR, d'úsáid eolaithe Escherichia coli DNA polymerase I, Ach tá fadhb ann leis an einsím seo: ní mór dó einsím nua a athlánú gach uair a dhéantar timthriall, rud a fhágann go bhfuil na céimeanna oibríochta beagán casta agus go bhfuil sé deacair aimpliú go hiomlán go huathoibríoch.Réitíodh an fhadhb seo tar éis d'eolaithe Taq DNA polymerase a leithlisiú ó Thermus aquaticus de thaisme i 1988. Ó shin i leith, tá aimpliú uathoibríoch DNA tagtha chun cinn.Déanann fionnachtain an einsím seo freisinPCRteicneolaíocht atá áisiúil, praiticiúil agus uilíoch.Faoi láthair, is é Taq DNA polymerase an polymerase is coitianta i bhfeisteáin DNA.

2. PfuDNA

Mar a luadh thuas, tá fabht mór ag Taq DNase, agus mar sin tá eolaithe tar éis Taq DNA polymerase a mhodhnú go pointe áirithe chun aimpliú neamhshonrach a sheachaint mar gheall ar mhímheaitseáil, rud a d'eascair torthaí tástála míchruinn.Ach is féidir le modhnú Taq DNA polymerase bac a chur ar ghníomhaíocht DNA polymerase ag teocht an tseomra.Is féidir le PfuDNA polymerase a dhéanamh suas go maith le haghaidh na míbhuntáistí thuas de Taq DNA polymerase, ionas gur féidir an t-imoibriú PCR a dhéanamh de ghnáth, agus is féidir feabhas a chur go héifeachtach ar ráta ratha an aimplithe géine sprice.

3. Droim ar ais Transcriptase

Fuarthas trasna ar transcriptase droim ar ais i 1970. Úsáideann an einsím seo RNA mar theimpléad, dNTP mar fhoshraith, leanann sé prionsabal na bunphéireála, agus sintéisíonn sí snáithe amháin DNA atá comhlántach leis an teimpléad RNA sa treo 5′-3′.Braitheann transcriptase droim ar ais go príomha ar ghníomhaíocht DNA polaiméaráis ó theimpléid DNA nó RNA agus mar sin níl aon ghníomhaíocht exonuclease 3′-5′ aige.Mar sin féin, tá gníomhaíocht RNase H aige, rud a chuireann teorainn áirithe ar fhad sintéise an transcriptase droim ar ais.Mar gheall ar dhílseacht íseal agus ar theirmsheasmhacht an transcriptase droim ar ais fiáin, d'athraigh eolaithe é freisin.

Le haghaidhPCRturgnaimh, is iad na príomhábhair inchaite: feadán PCR aonair, feadán PCR 4/8-stiall, plátaí PCR.

Labio arearraí inchaite PCRbhfuil an méid seo a leanasbuntáistí:

Plátaí PCR: Comhoiriúnacht leathan timthriallta teirmeach;Sainaithint ardchodarsnachta, éasca go maith;machnamh fluaraiseachta go maith;go maithaistriú teasa;DNase deimhnithe, RNase, DNA, coscairí PCR, agus tástáil saor ó phirogen.

Feadáin PCR aonair: Galú-resistant;go maithaistriú teasa;soiléireacht optúil den scoth; DNase deimhnithe, RNase, DNA, coscairí PCR, agus tástáil saor ó phirogen.

Feadáin PCR 4/8-stiallacha: Ballaí ultra-tanaí; soiléireacht ard; frithchaitheamh fluaraiseachta maith;is féidir a úsáid i dtionscal cógaisíochta, tionscal bia, agus bitheolaíocht mhóilíneach; ard-chaighdeán, maighdean ábhar PP; DNase deimhnithe, RNase, DNA, coscairí PCR, agus tástáil-saor ó phirogen.